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Recombinant DT3C (Diphtheria toxin & spg 3C domain) for Antibody Internalization Assay (Active)

In Stock
  • 中文名稱：
  • 貨號：
    CSB-EP360556CQR1
  • 規(guī)格：
  • 圖片：
    • (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.
    • Activity
      After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CHOK1/Human CCR8 cells (CSB-SC004847HU2). The ED50 is 0.3708-0.5608 μg/ml. Biological Activity Assay
    • Activity
      After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CT26/Human CCR8 cells (CSB-SC004847HU3). The ED50 is 0.4661-0.8614 μg/ml. Biological Activity Assay
  • 其他：

產品詳情

  • 純度：
    Greater than 90% as determined by SDS-PAGE.Greater than 90% as determined by SEC-HPLC.
  • 內毒素：
    Less than 1.0 EU/ug as determined by LAL method.
  • 生物活性：
    ①After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CHOK1/Human CCR8 cells (CSB-SC004847HU2). The ED50 is 0.3708-0.5608 μg/ml.②After DT3C 10μg/ml formed complexes with different concentrations of Anti-CCR8 antibodies (CSB-RA004847MA3HU), cytotoxicity experiments were conducted on CT26/Human?CCR8?cells?(CSB-SC004847HU3). The ED50 is 0.4661-0.8614 μg/ml.
  • 基因名：
    DT3C
  • Uniprot No.：
  • 種屬：
    N/A
  • 蛋白長度：
    Linked Heterodimer
  • 來源：
    E.coli
  • 分子量：
    69.4 kDa
  • 表達區(qū)域：
    33-417aa（P00588）+linker（GGGGSGGGGSGGGGS）+291-497aa (P19909)
  • 氨基酸序列
    GADDVVDSSKSFVMENFSSYHGTKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDDDWKGFYSTDNKYDAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALKVDNAETIKKELGLSLTEPLMEQVGTEEFIKRFGDGASRVVLSLPFAEGSSSVEYINNWEQAKALSVELEINFETRGKRGQDAMYEYMAQACAGNRVRRSVGSSLSCINLDWDVIRDKTKTKIESLKEHGPIKNKMSESPNKTVSEEKAKQYLEEFHQTALEHPELSELKTVTGTNPVFAGANYAAWAVNVAQVIDSETADNLEKTTAALSILPGIGSVMGIADGAVHHNTEEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAAYNFVESIINLFQVVHNSYNRPAYSPGHKGGGGSGGGGSGGGGSIDEILAALPKTDTYKLILNGKTLKGETTTEAVDAATAEKVFKQYANDNGVDGEWTYDDATKTFTVTEKPEVIDASELTPAVTTYKLVINGKTLKGETTTEAVDAATAEKVFKQYANDNGVDGEWTYDDATKTFTVTEKPEVIDASELTPAVTTYKLVINGKTLKGETTTKAVDAETAEKAFKQYANDNGVDGVWTYDDATKTFTVTE
  • 蛋白標簽：
    N-terminal?6xHis-tagged
  • 產品提供形式：
    Lyophilized powder
    Note: We will preferentially ship the format that we have in stock, however, if you have any special requirement for the format, please remark your requirement when placing the order, we will prepare according to your demand.
  • 緩沖液：
    Lyophilized from a 0.2 μm filtered PBS, 6% Trehalose, pH 7.4
  • 復溶：
    We recommend that this vial be briefly centrifuged prior to opening to bring the contents to the bottom. Please reconstitute protein in deionized sterile water to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL.We recommend to add 5-50% of glycerol (final concentration) and aliquot for long-term storage at -20℃/-80℃. Our default final concentration of glycerol is 50%. Customers could use it as reference.
  • 儲存條件：
    Store at -20°C/-80°C upon receipt, aliquoting is necessary for mutiple use. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
  • 保質期：
    The shelf life is related to many factors, storage state, buffer ingredients, storage temperature and the stability of the protein itself.
    Generally, the shelf life of liquid form is 6 months at -20°C/-80°C. The shelf life of lyophilized form is 12 months at -20°C/-80°C.
  • 貨期：
    Basically, we can dispatch the products out in 3-7 working days after receiving your orders. Delivery time may differ from different purchasing way or location, please kindly consult your local distributors for specific delivery time.
  • 注意事項：
    Repeated freezing and thawing is not recommended. Store working aliquots at 4℃ for up to one week.
  • Datasheet & COA：
    Please contact us to get it.

產品評價

平均分:
5.0分 - 4 個評價

實驗應用：抗體內化實驗

產品評價： 我購買了CSB-EP360556CQR1用于抗體內化檢測，使用了CUSABIO推薦的實驗流程，實驗流程很詳細，服務也很周到。我用DT3C在不同的細胞中檢測，并顯示出不同的效果。我發(fā)現不同類型的細胞對DT3C的敏感度不同，其中一些細胞在抗體內化測定中顯示出更好的結果?？贵w內化的效率與抗原密度、抗體親和力以及抗體和抗原結合表位密切相關。針對同一靶標的不同抗體也會表現出不同的內化效率。因此，建議在早期階段可以多測試幾個細胞。

By 張老師

實驗應用：抗體內化實驗

產品評價： 用CUSABIO的DT3C產品進行抗體內化效率檢測，與其他方法相比，其mAb-DT3C復合物制備簡單，且其抗體內化效率高于Mab-ZAP，性價比較高。我們會再次購買。

By 何老師

實驗應用：細胞實驗

產品評價： 我購買了DTC3重組蛋白用于雜交瘤細胞篩選，參考了某文獻中的實驗流程，結果很理想。具體實驗流程如下： 用DT3C對雜交瘤細胞進行篩選：取96孔板，向每個孔中加入4μg/mL的DT3C（25微升），然后加入得到的雜交瘤的培養(yǎng)上清液（25微升），混勻后在室溫下孵育30分鐘。將NOR-P1細胞以2 x 10^5細胞/mL的濃度（RPMI培養(yǎng)基，含10%低IgG FBS (+)）接種，然后在37℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天。培養(yǎng)后通過顯微鏡觀察，確定粘附細胞數約為使用陰性對照抗體時粘附細胞數的25%或更少的孔為陽性。將選定的克隆進行一個或兩個亞克隆步驟，以建立8個單克隆雜交瘤細胞系。

By 何老師

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問答及客戶評論

■ 常見問題解答
Q:

請給我們關于處理這個產品重組DT3C蛋白（CSB-EP360556CQR1）的建議，推薦的生物安全級別（BSL）是多少？

A:
該蛋白不具有傳染性或致病性，可以像常規(guī)蛋白一樣正常運輸。如果您只是將此蛋白用于普通實驗或檢測，BSL-1可以滿足需求。如果您的實驗需要無菌操作，則需要BSL-2級別。
Q:

我對你們的產品DT3C重組蛋白用于抗體內化檢測很感興趣，想知道這對于膠質母細胞瘤是否有效？

A:
我們目前尚未進行相關實驗驗證。如果您有興趣，我們可以提供一個小樣本供您測試。
Q:

如果在孵育DT3C和抗體時，存在無血清培養(yǎng)基，是否會影響它們的結合？

A:
您可以使用無血清培養(yǎng)基或PBS。因為血清中含有IgG，IgG將會與DT3C結合。
Q:

DT3C蛋白能夠檢測ADC藥物抗體的內吞效率嗎？

A:
DT3C蛋白主要用于與候選抗體結合，模擬ADC藥物抗體，并檢測候選抗體的內吞效率。然而，ADC藥物抗體本身具有誘導細胞內吞的功能，因此ADC藥物抗體的內吞效率不需要DT3C的輔助。
Q:

DT3C的有效濃度是多少？

A:
DT3C的有效濃度為1-4ug/ml，您可以參考以下步驟來確定最佳DT3C濃度和抗體濃度。
第一步：固定抗體濃度（過量），拉DT3C梯度，確定最佳的DT3C殺傷濃度；
第二步：固定最佳的DT3C濃度，拉抗體梯度，確定最佳的抗體內化濃度；
第三步：根據稀釋比例，將最佳的DT3C濃度和最佳的抗體濃度一起進行測試。
Q:

DT3C和抗體的結合表位是什么？

A:
DT3C結合到抗體的Fc末端。
Q:

DT3C蛋白的特異性是什么（添加后對細胞的影響）？

A:
DT3C利用鏈球菌protein G的3C domain結合抗體的Fc，其結合特性與protein G結合抗體Fc相同。mAb-DT3C只有通過抗體和靶細胞之間的特異性結合內化到細胞中時才會產生殺傷作用，DT3C本身在細胞外對細胞沒有毒性。
Q:

您是否檢查了您的重組DT3C產品在抗體內化檢測中的生物活性？如果是的話，能否分享生物活性的驗證數據？

A:
相關的活性測試仍在進行中，因此我們目前無法提供測試結果供客戶參考，但我們可以結合我們目前的工作（文獻和產品COA）給予一些建議和參考資料。
DT3C使用鏈球菌蛋白G的3C區(qū)域來結合抗體的Fc。其結合特性與結合蛋白G的抗體Fc相同。它可以結合到多種物種的IgG（包括人類、小鼠、兔子、山羊等），還可以結合到多種亞型（IgG1/2/3/4等），但其特定的結合強度（親和力）尚未測試。
理論上，一個抗體可以結合到兩個DT3C（DAR=2），但可能存在不均勻性，也可能與具體的抗體相關。目前暫未測試具體數值，因此建議在早期階段探索最佳的耦合比。
首先可以固定抗體濃度為10ug/ml（過量），然后探索DT3C的梯度（0-10ug/ml），確定最佳的DT3C殺傷濃度，然后固定最佳的DT3C濃度，并將mAb拉到梯度中測試抗體的內化效率。目前，我們已經收到一些客戶的反饋，大部分測試結果較好，但也有一些不行，分析與細胞類型有關。如果有DT3C背景殺傷，可能是細胞具有非抗體內吞作用，因此建議在早期階段多測試幾個細胞。
以下圖片為我們DT3C的測試結果。
Q:

同樣作為ADC藥物抗體內化檢測的工具，與Mab-ZAP相比，DT3C的優(yōu)勢是什么？

A:
DT3C與Mab-ZAP相比，在抗體藥物內化效率方面具有以下三個優(yōu)勢： 首先，mAb-DT3C共軛物的制備簡單，僅需在室溫下孵育30分鐘即可形成，可在體外發(fā)揮患者接受的ADC藥物的功能；
其次，DT3C可以與來自不同物種（如人類、小鼠、兔子、山羊）的任何IgG結合，形成mAb-DT3C共軛物，從而進一步擴展DT3C作為檢測mAb抗體內化的工具的適用范圍；
第三，只有當mAb-DT3C共軛物被靶細胞內化時，細胞的存活率才顯著降低。
值得一提的是，在有了DT3C之前，Mab-ZAP是唯一一種用于檢測細胞內mAb內化效率的工具。Mab-ZAP由小鼠抗體和核糖體失活蛋白薩普霉素組成。當mAb-Mab-ZAP共軛物被細胞內化時，由于薩普霉素的毒性，細胞會發(fā)生凋亡。因此，通過細胞的存活率可以檢測mAb是否被細胞內化。然而，Mab-ZAP本身可能在一定程度上減少mAb的內化效率，因為Mab-ZAP是含有抗小鼠抗體的大分子。與Mab-ZAP相比，mAb-DT3C共軛物的分子量穩(wěn)定且較小于mAb-Mab-ZAP。此外，相關實驗數據顯示，mAb-DT3C的內化效率高于mAb-Mab-ZAP。
Q:

我們已經訂購了1 mg的重組DT3C蛋白（CSB-EP360556CQR1），對測試結果非常滿意，我們希望批量訂購至少5 mg，是否有更多折扣？您是否有相同批號的現貨？如果沒有，交貨周期是多久？

A:
對于批量訂購，我們可以提供額外的折扣。這是我們的熱銷產品之一，目前沒有相同批號的現貨，但是在新批次的生產過程中，我們將嚴格遵循標準操作規(guī)程，并進行嚴格的質量控制，以確保批間差異盡可能小。目前我們有很多新批次的庫存，收到您的訂單后，我們可以在3-5個工作日內發(fā)貨。
Q:

剛剛收到你們關于介紹DT3C用于抗體內化檢測的郵件，想咨詢一下。我有一種類似于ADC的藥物，但連接體前面的所有部分都是合成的，可以用DT3C來檢測內化以及內化速率嗎？

A:
DT3C主要用于測量抗體的內化效率，對于ADC類似物的內化速率不適用。 CUSABIO的重組DT3C（白喉毒素和蛋白G 3C區(qū)域），包含沒有受體結合域的白喉毒素（DT）和鏈球菌蛋白G的C1、C2、C3（3C）區(qū)域。DT3C是一種有效的工具，用于檢測單克隆抗體（mAb）在Mab-ZAP處理后細胞內的內化效率。有研究顯示，與mAb-Mab-ZAP相比，mAb-DT3C模擬了具有易于制備、分子量穩(wěn)定性和高抗體內化效率等特點的抗體藥物聯結物（ADC）。據不完全統計，DT3C已被用于近130個ADC藥物mAb篩選專利中，作為一種檢測細胞抗體內化能力的工具。
Q:

DT3C是否只有BMK的殺傷效應？

A:
在正常情況下，BMK-DT3C在發(fā)生細胞內吞時會產生細胞毒性作用，而其他mAb-DT3C如果能內吞進入細胞內，也會產生細胞毒性作用。因為當它們被內化到細胞中時，DT3C被細胞質弗林蛋白酶切割，DT3C的催化結構域釋放到細胞質中，DT3C的催化結構域導致延伸因子（EF）-2的ADP核糖基化，隨后通過抑制蛋白質翻譯機制導致細胞毒性。