大腸桿菌表達(dá)純化服務(wù)

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)簡單、遺傳背景清楚、目的基因表達(dá)水平高、培養(yǎng)周期短等優(yōu)勢，被認(rèn)為最廣泛最經(jīng)濟(jì)實惠的經(jīng)典表達(dá)系統(tǒng)，近幾十年，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)也不斷發(fā)展和完善，被科研及工業(yè)用戶大量用于各種重組蛋白表達(dá)。該系統(tǒng)主要用于抗原制備、配體制備以及細(xì)胞因子和細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等）蛋白的表達(dá)。

華美生物在大腸桿菌蛋白表達(dá)和純化方面擁有豐富的經(jīng)驗，通過不斷的優(yōu)化實驗條件能解決蛋白表達(dá)純化過程中的各種疑難問題。

擁有豐富的表達(dá)純化經(jīng)驗和專業(yè)技術(shù)，通過不斷的優(yōu)化實驗條件能解決蛋白表達(dá)純化過程中的各種疑難問題。自2007年起的15年里，我們成功開發(fā)了7000多種在大腸桿菌中表達(dá)的重組蛋白，其中包含數(shù)百種高純度的活性蛋白。

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系統(tǒng)優(yōu)勢服務(wù)優(yōu)勢我們承諾服務(wù)內(nèi)容案例展示

系統(tǒng)優(yōu)勢

遺傳背景清楚；
蛋白表達(dá)周期短，易放大；
生長速度快，表達(dá)水平高；
可選擇載體和融合標(biāo)簽多；
可調(diào)控不同參數(shù)得到最適表達(dá)。

服務(wù)優(yōu)勢

超高性價比，低至3500元起；
表達(dá)成功率高達(dá)98%；
上清率>72%；
貨期短，25個工作日內(nèi)即可交付；
產(chǎn)量高達(dá)200mg/L。

我們承諾

無風(fēng)險定制，不成功不收費

注：該無風(fēng)險定制蛋白服務(wù)僅適用于800個氨基酸以內(nèi)的蛋白質(zhì)。如果您需要表達(dá)超過800個氨基酸的蛋白質(zhì)，我們將按步驟收費。

服務(wù)內(nèi)容

步驟	服務(wù)項目	服務(wù)說明	華美生物特色	周期
1	質(zhì)粒構(gòu)建	密碼子優(yōu)化全基因合成	多個載體優(yōu)化為了得到最高的表達(dá)量蛋白,多個載體同時優(yōu)化，縮短了貨期，讓客戶有更多的選擇。	5-10工作日
		PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切連接到PCold-SUMO,pGEX-4T-1,pET22b-JT等多個融合載體上
		轉(zhuǎn)化TOP10宿主
		獲得測序正確的重組質(zhì)粒
2	轉(zhuǎn)化及菌株篩選	構(gòu)建重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)、Rosetta-gami B(DE3)pLysS、C41等宿主, 37℃過夜培養(yǎng)	多條件優(yōu)化、多宿主選擇小試中對其溫度、IPTG量進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化出合適的培養(yǎng)條件，同時多個宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化選擇表達(dá)量最高的宿主菌。	5工作日
		挑取單菌落進(jìn)行小量誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE電泳檢測,保種
		進(jìn)行表達(dá)條件優(yōu)化，確定最佳表達(dá)條件
3	目標(biāo)蛋白表達(dá)及純化	根據(jù)小量結(jié)果提供1-10L放大體系表達(dá)	多條件優(yōu)化上清表達(dá) 表達(dá)載體和菌株優(yōu)化，超低溫條件誘導(dǎo)，最大程度保持蛋白可溶性達(dá)72%以上	12-15工作日
3	目標(biāo)蛋白表達(dá)及純化	多種表達(dá)策略和純化方式同時進(jìn)行		12-15工作日
4	其他（可選）	通過酶切去除標(biāo)簽	靈活的附加服務(wù)（可選）提供多種附加服務(wù)，客戶可根據(jù)實驗需求靈活選擇	3個工作日
4	其他（可選）	所有蛋白都可以提供無菌操作和內(nèi)毒素去除服務(wù)	靈活的附加服務(wù)（可選）提供多種附加服務(wù)，客戶可根據(jù)實驗需求靈活選擇	3個工作日
5	質(zhì)控	進(jìn)行純度、濃度等檢查，并提供QC報告	詳細(xì)的質(zhì)控報告為每個項目提供產(chǎn)品說明書及完善的質(zhì)控報告	3-5工作日
總時間				25-35工作日

案例展示

案例1：

特色：融合表達(dá)蛋白采用PreScission酶進(jìn)行酶切，通過GST親和層析柱上酶切一步純化得到無標(biāo)簽蛋白。

蛋白酶切示意圖

泳道1：細(xì)胞裂解液（箭頭所指為融合蛋白）
泳道2：穿透液
泳道3：酶切穿透（箭頭所指為目的蛋白）
泳道4：PBS除雜
泳道5：GSH洗脫（箭頭所指為GST標(biāo)簽蛋白）
泳道6：目的蛋白濃縮

案例2：

特色：此蛋白通過鎳柱親和層析一步純化得到目的蛋白，純度可以達(dá)到90%，產(chǎn)量可以達(dá)到20mg/L。

泳道1：細(xì)胞裂解液
泳道2：穿透液
泳道3：30 mM 咪唑洗脫
泳道4：60 mM 咪唑洗脫
泳道5：200 mM 咪唑洗脫
泳道6：500 mM 咪唑洗脫

案例3：

特色：同個項目可以有多個融合標(biāo)簽選擇。

N-terminal GST-tagged

泳道1：細(xì)胞裂解液
泳道2：穿透
泳道3：GSH洗脫

N-terminal 6xHis-SUMO-tagged

泳道1：60 mM 咪唑洗脫濃縮
泳道2：200 mM 咪唑洗脫濃縮
泳道3：500 mM 咪唑洗脫濃縮

案例4：

特色：蛋白活性。

The Binding Activity of aqpZ with ytfE

Activity: Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized aqpZ at 5 μg/ml can bind human ytfE, the EC50 of human ytfE protein is 197.90-259.70 μg/ml.

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武漢華美生物工程有限公司成立于2007年12月，是一家集科研、生產(chǎn)、銷售為一體的生物高新技術(shù)企業(yè)。并形成了以CUSABIO為品牌的ELISA試劑盒、蛋白、抗體等多種優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，遠(yuǎn)銷歐美日德等九十多個國家。
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