腫瘤免疫治療新興靶點(diǎn)ROR1，究竟有多大潛力？

1、什么是ROR1？

ROR1是受體酪氨酸激酶樣孤兒受體（ROR）家族成員之一，屬于I型受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。與核受體中的ROR家族不同，ROR是一類膜受體。它們與家族中的原肌球蛋白激酶受體家族(tropomyosin-related kinase, Trk)、骨骼肌特異性酪氧酸激酶樣受體家族(muscle specific knase, MuSK)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子酯氨酸激酶受體家族(neurotrophic tyrosine kinase receptor, NT-RTK)關(guān)系密切，由于ROR蛋白最初發(fā)現(xiàn)時(shí)配體未知，所以被定義為孤兒受體 ^[1]。

ROR家族的另一個(gè)成員是ROR2，ROR1與ROR2氨基酸序列的同源性達(dá)58%。其中ROR1又含有2種亞型：完整的細(xì)胞膜受體型ROR1以及截短型變異體。截?cái)嘈妥儺愺w主要分為無(wú)胞外結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1I與只含胞外結(jié)構(gòu)的可溶型ROR1 ^[2]?？扇苄蚏OR1的表達(dá)在正常人與腫瘤患者中并無(wú)差異，血清中的表達(dá)量很低或者檢測(cè)不到，且與疾病的進(jìn)展和嚴(yán)重程度無(wú)關(guān)，而完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1在多種腫瘤組織特異性高水平表達(dá) ^[3]。后文中所提到的ROR1都是指完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1。

2、ROR1的結(jié)構(gòu)與功能

ROR1是一種跨膜受體酪氨酸激酶蛋白。ROR1編碼基因共2814bp，位于染色體1p31.3。ROR1膜蛋白由937個(gè)氨基酸組成，分子量約105 kDa。ROR1結(jié)構(gòu)在生物種間高度保守，如人與鼠的ROR1氨基酸序列同源性可達(dá)97%。如圖1所示，人源ROR1由一個(gè)胞外的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(Ig)、兩個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(FZD)、近膜kringle結(jié)構(gòu)域、單次跨膜結(jié)構(gòu)以及一個(gè)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域（TKD）、兩個(gè)絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域(S/TRD)和一個(gè)脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域（PRD）組成 ^[4]。

圖1. The structure of ROR1

*圖片參考文獻(xiàn)發(fā)表在Protein Cell上^[4]。

免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和半胱氨酸富集結(jié)構(gòu)域與ROR1結(jié)合配體的功能相關(guān)。其中FZD結(jié)構(gòu)域由10個(gè)保守的半胱氨酸殘基和5個(gè)相應(yīng)的二硫鍵組成。FZD結(jié)構(gòu)還見(jiàn)于平滑肌家族受體（如Smo）、卷曲家族受體（如sFRP）、金屬羧肽酶Z（CPZ）、collagen α1 XVIII和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白 (LRP)。這些蛋白大都可以結(jié)合Wnt蛋白并參與Wnt通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前大量研究己經(jīng)證實(shí)ROR1也是通過(guò)FZD結(jié)合Wnt5a并激活非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路 ^{[5] [6]}。 Kringle結(jié)構(gòu)域在ROR家族中比較保守，由80個(gè)氨基酸組成 ^[7]。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是含有三個(gè)由二硫鍵形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，這三個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)也參與了ROR受體識(shí)別Wnt蛋白的過(guò)程。

ROR的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域在生物體高度保守，和Trk、MuSK的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域極其相似。但ROR1蛋白在這段高度保守的區(qū)域內(nèi)存在某些氨基酸序列的改變,提示其胞內(nèi)激酶活性有可能發(fā)生改變。絲/蘇氨酸、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域是由絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域、絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域三個(gè)結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成。該區(qū)域存在潛在的磷酸化位點(diǎn)、與下游信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)。

3、Wnt5a/ROR1與腫瘤

目前關(guān)于ROR1信號(hào)傳導(dǎo)的主流說(shuō)法是，ROR1可通過(guò)介導(dǎo)非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路（non-canonical Wnt pathways）的信號(hào)傳遞，在多種生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其中包括調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、增殖、遷移、和細(xì)胞趨化，尤其是Wnt5a。Wnt5a是典型的非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的激活因子，參與NF-κB亞基p65的磷酸化，激活腫瘤細(xì)胞中NF-κB通路，促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲，EMT、癌轉(zhuǎn)移等。接下來(lái)，我們具體了解下ROR1是如何通過(guò)Wnt5a信號(hào)通路激活腫瘤細(xì)胞的。

Wnt5a/ROR1在多種癌癥中的高度表達(dá)。作為Wnt5a的受體，ROR1參與激活腫瘤細(xì)胞NF-κB通路。NF-κB通路是炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)控的掌舵者，在多種腫瘤類型中組成性激活。如圖2所示，Wnt5a激活受體ROR1或FZD5，導(dǎo)致Dvl2/3激活和Akt磷酸化。Akt繼而促進(jìn)IKKα磷酸化激活I(lǐng)KK復(fù)合體，IKK復(fù)合體負(fù)責(zé)IκBα降解和NF-κB亞基p65的磷酸化。磷酸化的p65轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核促進(jìn)包括Wnt5a在內(nèi)的靶基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。Wnt5a的分泌又促進(jìn)新一輪的自主反饋循環(huán)。自主反饋循環(huán)ROR1/Akt/p65通路的激活會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)促炎因子（如IL-6）和趨化因子（如CCL2）的分泌。

圖2. The diagram of Wnt5a/ROR1 signaling

此外，有多項(xiàng)研究已將ROR1的表達(dá)與YAP / TAZ轉(zhuǎn)錄的激活相關(guān)聯(lián)，從而增強(qiáng)腫瘤發(fā)生和化學(xué)耐藥性 ^{[8] [9]}。如圖3所示，Wnt5a與ROR1 / FZD復(fù)合物的結(jié)合，然后通過(guò)結(jié)合Gα12/13進(jìn)一步激活RhoA，從而抑制Lats1/2活性，進(jìn)而導(dǎo)致YAP / TAZ去磷酸化和核易位。易位到細(xì)胞核里的YAP/TAZ與TEAD結(jié)合后可以誘導(dǎo)涉及細(xì)胞增殖、干細(xì)胞自我更新和腫瘤發(fā)生基因的轉(zhuǎn)錄。增加的YAP/TAZ轉(zhuǎn)錄反過(guò)來(lái)又可以上調(diào)ROR1表達(dá)。

圖3. Crosstalk between Wnt5a-ROR1 signaling and YAP/TAZ pathway

*圖片參考文獻(xiàn)發(fā)表在Cells上^[10]。

4、靶向ROR1的臨床意義

ROR1被認(rèn)為是個(gè)非常有潛力的靶點(diǎn)，因?yàn)樗鳛槔野彼峒っ甘荏w，具有可藥性；其次，它在細(xì)胞表面表達(dá)；更重要的是，它在腫瘤細(xì)胞中高度表達(dá)，而在成人健康組織中表達(dá)量很低。目前有多家公司在開(kāi)發(fā)靶向ROR1的抗癌療法，其中包括單克隆抗體、抗體偶聯(lián)藥物（ADC）、雙特異性抗體、以及CAR-T療法等多種治療模式（見(jiàn)下表）。免疫檢查點(diǎn)療法（ICT）已經(jīng)改變了許多腫瘤的治療模式，然而有些腫瘤類型對(duì)ICT的響應(yīng)率低，這大部分要?dú)w因于TME中高度的免疫抑制和腫瘤缺少T細(xì)胞浸潤(rùn)。在這種情況下，采用ICT聯(lián)合靶向ROR1/Wnt5a的療法有可能能解決響應(yīng)率低的問(wèn)題。

*表格數(shù)據(jù)來(lái)源于公開(kāi)資料

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● Recombinant Human Inactive tyrosine-protein kinase transmembrane receptor ROR1(ROR1),partial (Active)

Great Purity Determined by SDS-PAGE

Greater than 95% as determined by SDS-PAGE.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA

Immobilized ROR1 at 2 μg/ml can bind anti-ROR1 antibody (CSB-RA020067A1HU), the EC₅₀ is 0.2450-0.3416 ng/mL.